Metoda de cercetare serologică
Metoda serologică este un set de reacții, care se bazează pe interacțiunea antigen-anticorp (Ag-Ab) și au ca scop detectarea în ser și alte fluide corporale de anticorpi față de antigeni ai agenților infecțioși sau antigene microbiene adecvate. Metoda serologică se caracterizează prin sensibilitate și specificitate ridicată. Cele mai multe dintre reacțiile acestei metode este ușor de ținut și de cont, disponibile într-o gamă largă de laboratoare, de obicei în condiții de siguranță, economic, care pot fi supuse standardizării. Dezavantajele metodei serologice includ: 1) un rezultat indirect, atunci când etiologia bolii este judecat nu atribui agentului patogen, și prin răspunsul (imun) organismului la agentul patogen; 2) necesitatea intervenției parenterale în corpul pacientului; 3) majoritatea diagnosticului tardiv, datorită dinamicii naturale a răspunsului imun umoral; 4) disponibilitatea anamnestic Am (ca urmare a transferat anterior o boală sau vaccinare) a unui Am infecție curent. La determinarea antigenelor microbiene dezavantaje 3 si 4 sunt absente, dar trebuie să fie adaptate pentru a se potrivi cu diferite antigene microbiene de circulație și se referă aceste caracteristici, cu capacitatea de a capta materialul pentru a studia.
Etapele de metode serologice:
1) să ia materialele pentru cercetare. In cele mai multe cazuri, materialul este ser. Se obține după formarea unui cheag de sânge, de sânge trebuie să ia în condiții strict aseptice în conformitate cu procedura standard,
2) selectarea unui test serologic pentru cazul dat depinde de scopul cercetării, bolilor destinate, faza bolii, material de cercetare, sensibilitățile de reacție, caracteristici specifice de laborator. Pentru detectarea Ab și Ag folosind aglutinare (PA). hemaglutinare pasivă (PHA)), imunofluorescenta (IFA). inhibare a hemaglutinării (HAI). precipitare. floculare. fixarea complementului (RAC), și altele.
3) stabilirea reacției serologice
4) Se verifică reacția serologic pentru determinarea prezenței markerilor serologici infecție.
Reacțiile serologice caracteristice diverse ale mai multor caracteristici comune:
1) deoarece orice reacții serologice sunt reacțiile de interacțiune dintre Am și Ar, în toate cazurile, pentru a determina prezența Al în substratul de testare setul necesar de standardul cunoscut sau corpuscular Ar solubil numit diagnosticums. La rândul său, pentru a determina prezența Ag într-un set de seruri imune de diagnostic
2) reacția Ar și Ar este efectuată numai în prezența unui electrolit, care este de obicei folosit soluția izotonică de clorură de sodiu sau un amestec tampon, pH-ul sistemului trebuie să fie de aproximativ 7,
3) pentru a forma complexul Ag-Ab necesită perioade de incubare, în condiții speciale de temperatură (de la + 4 ° C până la 37 ° C). formarea de complexe imune specifice apare rapid; vizibile cu ochiul liber fenomenul (aglutinare, liza, etc ..) - încet, timp de câteva ore sau chiar zile,
4) ambele componente răspuns serologic (anticorp și antigen) trebuie să fie prezente într-un raport echivalent. Un exces de oricare dintre componentele formării blocurilor complexe de Ag-Al și contribuie la rezultate fals negative.
Contabilizarea pentru testele serologice efectuate vizual, și, uneori, cu o lupă. Reacția serologic cont esență se reduce la determinarea fenomenului legării Ab și Ag formarea complexului Ar-Am. Vizual formarea complexului Ar-Ar este însoțită de două fenomene principale - aglutinare și precipitare. Diferențele dintre ele sunt determinate de particularitățile de antigeni și anticorpi specifici acestora. În același timp, între antigenele microbiene sunt prezente și cele care induc sinteza nepretsipitiruyuschih, formarea de complexe Ar-Ar, în acest caz nu este însoțită de nici un fenomen de aglutinare și nici un fenomen de precipitare, și detectarea faptului formării complexe Ar-Ar necesita etichete speciale de etichetare reacție componente de diagnosticare sau transferul antigenului de diagnostic la o altă stare de agregare.
Atunci când se evaluează reacția angajat trei criterii principale: 1) prezența și intensitatea reacțiilor (și alte avantaje). 2) Titrul de diagnosticare, 3) creșterea titrului de Al in bolii in 4 sau mai multe ori. Prezența reacției a fost ajustată prin fenomene vizuale sau legarea marker de imunochimice. Pentru a evalua intensitatea reacției serologice utilizează principiul 4 „+“ (Tabelul 7).
Sistemul de evaluare a testelor serologice pe 4 „+“ pentru reacțiile de aglutinare și precipitare